Tečna hromatografija visokih performansi uglavnom uključuje sistem za ubrizgavanje, sistem za infuziju, sistem za odvajanje, sistem za detekciju i sistem za obradu podataka. U nastavku ćemo predstaviti njihove odgovarajuće kompozicije i karakteristike.
1. Sistem za ubrizgavanje generalno koristi membranski injektor ili komoru za ubrizgavanje pod visokim pritiskom da završi operaciju ubrizgavanja, sa konstantnom zapreminom ubrizgavanja. Ovo je korisno za poboljšanje ponovljivosti analize uzorka.
2. Infuzioni sistem se sastoji od tri dela: pumpe visokog pritiska, rezervoara mobilne faze i merača gradijenta. Opšti pritisak pumpe visokog pritiska je l. 47-4.4X107Pa, podesiv i stabilan protok. Kada mobilna faza visokog pritiska prođe kroz hromatografsku kolonu, može smanjiti efekat difuzije uzorka unutar kolone, ubrzati brzinu kretanja unutar kolone, poboljšati stepen razdvajanja i povratiti uzorak. Koristan za održavanje biološke aktivnosti uzorka. Greška skladištenja mobilne faze i analizator gradijenta može promijeniti mobilnu fazu prema svojstvima stacionarne faze i uzorka, uključujući promjenu polariteta, jonske snage i pH vrijednosti eluenta, ili korištenjem kompetitivnih inhibitora ili denaturirajućih agenasa. Ovo omogućava efikasno odvajanje više supstanci, čak i ako postoji samo jedan skup razlika ili izomera.
3. Sistem odvajanja uključuje hromatografske kolone, spojne cijevi, termostate itd. Dužina hromatografske kolone je općenito 10-50cm (ako su potrebne dvije, može se dodati spojna cijev između njih), sa unutrašnjim prečnikom od 2-5 mm, izrađene od visokokvalitetnog nehrđajućeg čelika ili staklene cijevi debelih stijenki ili legure titana. Postoji fiksna faza sa veličinom čestica od 5-10 μm (sastavljena od matrice i fiksativa). Matrica u stacionarnoj fazi je napravljena od smole visoke mehaničke čvrstoće ili silika gela, koji imaju inertnost (kao što je uklonjen alkalni silika gel), poroznost (veličina pora do 1000?) i veliku specifičnu površinu. Oni su mehanički obloženi za spajanje (slično kao priprema stacionarnih faza gasne hromatografije), ili hemijski spojeni sa različitim genima (kao što su fosfat, kvaternarni amino, hidroksimetil, fenil, amino ili različite dužine alkilnog lanca ugljenika) ili ligandnim organskim jedinjenjima . Dakle, ova fiksna relativna struktura ima dobru selektivnost. Na primjer, nakon spajanja aglutinina graška (PSA) na površini poroznog silika gela, mogu se izolirati glikoproteini u fibroblastima. Osim toga, plazmid baziran na stacionarnoj fazi je mali i sloj kolone je lako postići ujednačeno i gusto stanje. Lako je smanjiti efekat difuzije vrtložne struje. Veličina čestica matrice je mala, mikropore su plitke, a prijenos mase uzorka u mikroporoznom području je kratak. Oni su korisni za smanjenje propusnosti i poboljšanje rezolucije. Prema analizi teorije efekta stupca, manja je veličina čestica matrice i veći je teoretski broj N ploče. Ovo dalje dokazuje da što je manja veličina čestica matrice, to je veći stepen razdvajanja. Pored toga, termostati za tečnu hromatografiju visokih performansi mogu podesiti temperaturu od sobne temperature do 60 stepeni, skraćujući vreme analize povećanjem brzine prenosa mase., Može poboljšati efikasnost hromatografske kolone.
4. Uobičajeni detektori za HPLC sisteme za detekciju uključuju ultraljubičaste detektore, detektore indeksa prelamanja i detektore fluorescencije.
(1) UV detektor je pogodan za detekciju uzoraka sa karakteristikama apsorpcije pod ultraljubičastim (ili vidljivim) svjetlom. Njegove karakteristike: širok spektar primjene (kao što su proteini, nukleinske kiseline, aminokiseline, nukleotidi, peptidi, hormoni, itd.); Visoka osjetljivost (granica detekcije od 10-10g/ml); Široki linearni raspon; Nije osjetljiv na promjene temperature i protoka; Može detektovati uzorke eluirane sa gradijentnim rastvorima.
(2) Detektor diferencijalnog indeksa prelamanja može se koristiti za detekciju svih komponenti uzorka s indeksima prelamanja različitim od onih koje detektuje detektor mobilne faze. Trenutno se većina jedinjenja ugljikohidrata otkriva pomoću ovog sistema za detekciju. Sistem ima jaku univerzalnost i jednostavan rad, ali nisku osjetljivost (granica detekcije od 10-7g/ml), a promjene u mobilnoj fazi mogu uzrokovati promjene indeksa prelamanja. Stoga nije pogodan ni za analizu tragova niti za detekciju gradijentnih uzoraka eluiranja.
(3) Fluorescencijski detektor je pogodan samo za određivanje fluorescentnih organskih spojeva (kao što su policiklični aromatični ugljovodonici, aminokiseline, amini, vitamini i određeni proteini) pod određenim uvjetima, na osnovu intenziteta fluorescencije i koncentracije emitirane svjetlosti. Njegova osjetljivost je vrlo visoka (granica detekcije je 10-12~10-14g/ml), i može se koristiti za analizu tragova i detekciju u radu eluiranja gradijenta.
5. Sistem za obradu podataka može prikupljati, pohranjivati, prikazivati, ispisivati i obraditi podatke testa za odvojene uzorke i može ispravno obaviti rad na pripremi ili identifikaciji